X
XLinkedinWhatsAppTelegramTelegram
0
Czytaj ten artykuł w:

Wykrywanie i diagnostyka zakażeń świń wirusem grypy typu A

Ekologia zakażeń wirusem grypy u świń uległa zmianie na skutek mutacji i reasortacji w genomie drobnoustroju, co pociągnęło za sobą rozwój nowych metod i sposobów diagnostyki grypy.

1 grudzień 2014
X
XLinkedinWhatsAppTelegramTelegram
0

Wirus grypy typu A (influenza A virus – IAV) jest czynnikiem etiologicznym ważnej choroby układu oddechowego świń występującej na całym świecie. Ze względu na komplikującą się ekologię zakażeń IAV u świń, na skutek reasortacji i mutacji wirusa, pojawiły się nowe możliwości wykrywania wirusa i rozpoznawania choroby.

Obecnie dostępne są metody bezpośredniego wykrywania bieżącej infekcji wirusem grypy jak i pośrednie umożliwiające potwierdzanie wcześniejszego kontaktu z drobnoustrojem. Pobieranie próbek w celu bezpośredniej identyfikacji powinno uwzględniać okres replikacji wirusa i siewstwa, które mają miejsce 1-8 dniu po zakażeniu. Przeciwciała swoiste mogą być wykrywane od 7-21 dnia po zakażeniu, i najlepiej jeśli ich poziom może być porównywany w odstępie 2-4 tygodni. Próbki diagnostyczne, bez względu na rodzaj, powinny być schładzane po pobraniu do 4°C i przesyłane do laboratorium z pakietami mrożeniowymi w ciągu 48 godzin (Ryc. 1).

Targeted sample collection for direct or indirect detection and diagnosis of influenza A virus infection in swine

Ryc.1. Schemat pobierania próbek w celu bezpośredniego i pośredniego wykrywania i diagnostyki zakażeń IAV u świń. Pobieranie próbek w celu wykrycia wirusa powinno mieć miejsce w okresie siewstwa w początkowej fazie infekcji. Wykrywanie przeciwciał może mieć miejsce w późniejszym okresie po zakażeniu.

Testy PCR są powszechnie wykorzystywane jako narzędzie wykrywanie IAV w wielu laboratoriach, w próbkach przyżyciowych jak i pośmiertnych, takich jak płyn ustny, wydzielina z nosa czy tkanka płucna. Testy PCR są szybkie, czułe i specyficzne ponieważ opierają się na wykrywaniu materiału genetycznego IAV, RNA. Ponadto PCR może być wykorzystywany do typowania szczepów wirusa, i określania czy zakażenie jest wywołane przez szczepy H1N1, H1N2 czy H3N2. Wyniki PCR z próbek pobieranych przyżyciowo powinny być interpretowane z ostrożnością ponieważ wyniki dodatnie mogą być uzyskiwane również od klinicznie zdrowych zwierząt. Przy badaniach w kierunku IAV w danej populacji wykorzystuje się również sekwencjonowanie niektórych genów wirusa, jak hemaglutyniny, a także izolację wirusa.

Badanie immunohistochemiczne (IHC) również może być wykorzystywane w rozpoznawaniu zakażeń świń wirusem grypy ale jego zastosowanie ogranicza się do tkanek utrwalonych w formalinie. W wyniku reakcji chemicznej dochodzi do wybarwienia antygenu IAV co można obserwować pod mikroskopem. Zaletą IHC jest możliwość obserwacji antygenu wirusa w obrębie zmian chorobowych w płucach. Na czułość i specyficzność testu wpływaj dobór próbek oraz proces utrwalania w formalinie.

W diagnostyce przyżyciowej IAV u świń wykorzystywane są również takie próbki jak płyn ustny i wydzielina z nosa. Płyn ustny stał się popularnym materiałem do badań diagnostycznych ze względu na łatwość pobierania oraz zdolność do reprezentowania dużej populacji. Płyn ustny pobiera się wieszając w kojcu bawełniany sznur na 20-30 minut. Należy dążyć do ograniczenia zanieczyszczenia paszą, kałem czy innym materiałem organicznym. Wydzielina z nosa jest pobierana przy użyciu patyczka zakończonego syntetycznym materiałem chłonnym i transportowana w podłożu płynnym odpowiednim dla materiału wirusowego, zabezpieczającym przed wysychaniem.

Płyn ustny może być trudny do pobrania od prosiąt noworodków. Bardzo łatwo jest go natomiast uzyskać od warchlaków, tuczników i dorosłych świń. Wadą płynu ustnego jest zawartość inhibitorów reakcji PCR a niewielka zawartość wirusa może utrudniać sekwencjonowanie lub izolację szczepów. Wymazy z nosa zwykle są łatwiejszym materiałem do sekwencjonowania i izolacji wirusa grypy ze względu na większą ilość drobnoustroju ale z drugiej strony wymaga to pobierania próbek od większej liczby świń w ostrej fazie zakażenia.

Rozpoznawanie klinicznej postaci zakażenia IAV u świń wymaga badania sekcyjnego analizy próbek płuc utrwalonych w formalinie oraz świeżych a także próbek tchawicy lub płynu laważowego. Tkanka płucna świń chorych na grypę jest zwykle ciemno-czerwona, z ogniskami stwardnienia w doczaszkowo brzusznych partiach płuc. Patolodzy zauważą objawy martwicy nabłonka w drogach oddechowych (oskrzela i oskrzeliki) zajętych płuc. Rozpoznanie klinicznej postaci zakażenia wirusem grypy jest możliwe na podstawie korelacji objawów klinicznych, zmian sekcyjnych i mikroskopowych, oraz wyniku badania laboratoryjnego takiego jak PCR czy IHC (Ryc. 2).

Samples collected for influenza detection

Ryc. 2. Wirus grypy jest ważnym czynnikiem chorób układu oddechowego świń. A. Zmiany mikrospokopowe wywołane zakażeniem IAV z martwicą nabłonka oskrzelików (strzałka) gdzie miało miejsce namnażanie się wirusa. B. Zmiany sekcyjne charakteryzują się obszarami stwardnienia tkanki płucnej o zabarwieniu ciemnoczerwonym. C. IAV może być wykryty metodą immunohistochemii (IHC). Brązowe zabarwienie jest widoczne w martwiczo zmienionym nabłonku oddechowym (strzałka).

W surowicy można przyżyciowo wykrywać obecność przeciwciał dla IAV. ELISA typu bloking do wykrywania przeciwciał dla konserwatywnej nukleoproteiny jest często wykorzystywana do potwierdzania kontaktu z wirusem, szczepienia, lub w przypadku prosiąt i warchlaków, do wykrywania przeciwciał siarowych. Test hamowania hemaglutynacji (HI) lub test seroneutralizacji wirusa (SVN), może pomóc w przewidywaniu odporności krzyżowej. Stosowanie szczepionek przeciw grypie oraz rozpowszechnienie zakażeń enzootycznych ogranicza użyteczność technik serologicznych w diagnostyce. Należy pamiętać aby wyniki badań serologicznych interpretować w kontekście stada i jego historii.

Rozpoznając zakażenia IAV lub grypę należy właściwie formułować pytania na jakie ma odpowiedzieć badanie i zastosować odpowiednie testy diagnostyczne. Od właściwie przeprowadzonego próbobrania i postępowania z próbkami będzie zależało jakie korzyści uzyskamy z diagnostyki IAV u świń.

Komentarze do artykułu

To miejsce jest przeznaczone do dyskusji między użytkownikami pig333.com a nie do zadawania pytań autorom artykułów
Skomentuj

Dostęp tylko dla użytkowników portalu 3trzy3. Zaloguj się aby dodać komentarz.

Nie jesteś subskrybentem tej zawartości Najnowsze wiadomości z branży

Newsletter o trzodzie na Twoim mailu

Zaloguj się i zapisz do subskrypcji

Powiązane artykuły

Nie jesteś subskrybentem tej zawartości 3trzy3 w 3 minuty

Cotygodniowy newsletter podsumowujący najnowsze informacje z 3trzy3.pl

Zaloguj się i zapisz do subskrypcji