Nowe narzędzia do monitorowania wirusa PRRS: jak z nich korzystać?

W wielu krajach rośnie liczba stad hodowlanych zakażonych endemicznie nowymi, dzikimi wariantami wirusa PRRS. Na wczesnych etapach ognisk PRRSV wpływ na produkcję występuje na całej drodze od stada hodowlanego do tuczników. Jednak wraz z rozwojem odporności stada, infekcja przechodzi w stan subkliniczny w stadzie hodowlanym. Objawy kliniczne na tym etapie są bardziej widoczne u rosnących świń, zwłaszcza pod koniec okresu odchowu, kiedy odporność matczyna słabnie.

Ścisłe monitorowanie zakażenia PRRSV ma kluczowe znaczenie dla zapewnienia szybkiego i całkowitego wyleczenia stada z zakażenia i objawów klinicznych. W odpowiedzi na tę potrzebę pojawiło się wiele nowych rozwiązań w zakresie systemów monitorowania i nadzoru, w tym podejść diagnostycznych i klinicznych.

Monitoring diagnostyczny

Według danych SDRS, w ciągu ostatniej dekady nastąpiło zasadnicze przejście od stosowania próbek surowicy do próbek populacyjnych do badania RNA PRRSV. Płyny ustne są głównym rodzajem próbek wykorzystywanych u świń rosnących do badań przesiewowych w kierunku obecności wirusa. W stadach hodowlanych najczęściej wykorzystywaną próbką są płyny po kastracji i obcinaniu ogonów (processing fluids), a następnie płyny ustne i tkanki.

Płyny PF są praktyczną próbką do badania aktywności PRRSV w stadach hodowlanych wykonujących fizyczną kastrację prosiąt. Obejmuje ona 2-7 dniowe prosięta ssące, przy czym wiele gospodarstw przekazuje jedną próbkę zbiorczą od prosiąt obsłużonych w ciągu tygodnia. Powszechnym podejściem jest zbieranie PF z jak największej liczby miotów i pomieszczeń, przechowywanie próbek w lodówce lub zamrażanie w gospodarstwie i przesyłanie dziennych próbek do jednego zbiorczego testu PCR, aby reprezentować dany tydzień. Gdy wyniki zaczną być ujemne w teście PCR, lekarze weterynarii mogą otworzyć pule, testując poszczególne dni osobno w celu zwiększenia czułości.

Gdy płyny ustrojowe zaczną stale dawać wynik ujemny w badaniu PCR (tj. 4-6 tygodni z rzędu), głównym pytaniem jest, czy populacja w wieku odsadzenia pozostaje ujemna. W takiej sytuacji, jeśli wirus nadal krąży w stadzie, częstość występowania będzie prawdopodobnie bardzo niska (częstość występowania ≤ 3%). W związku z tym potrzebny jest wysoce czuły system monitorowania. Wtedy właśnie pojawiają się rodzinne płyny ustne (FOF). FOF polega na zawieszeniu sznura w miejscu, w którym zarówno locha, jak i jej miot mają do niego dostęp, pozostawiając próbki płynu ustnego reprezentujące "rodzinę". Istnieją kalkulatory liczebności próbek, które pomagają ludziom w ustaleniu liczby próbek FOF i stopnia ich łączenia w zależności od wielkości porodówki i pożądanego poziomu ufności.

Innym niedawno opisanym podejściem jest wykorzystanie płynów z końca języka od martwych świń. Metoda ta opiera się na pobieraniu próbek od martwych zwierząt, gdzie prawdopodobieństwo obecności wirusa jest większe, i jest bardzo skuteczna w porównaniu z metodami pobierania próbek od żywych zwierząt. Ta metoda pobierania próbek oparta na ryzyku jest przydatna w przypadku nieoczekiwanego spadku wartości Ct wyników PCR z próbek PF, surowicy lub FOF. Ponadto, gdy występuje nietypowy długi czas uzyskiwania dodatnich wyników PCR (tj. 40 lub więcej tygodni po wybuchu epidemii PRRSV). Pobieranie próbek końcówek języka od martwo urodzonych prosiąt pozwala zrozumieć, czy infekcja pochodzi ze stada hodowlanego (tj. transmisja pionowa) czy z porodówki (tj. transmisja pozioma). Dr Isadora Machado i wsp. niedawno donieśli, że prawdopodobieństwo wykrycia RNA PRRSV w końcówkach języka martwo urodzonych świń było podobne lub wyższe niż w przypadku płynów technologicznych, surowicy i rodzinnych płynów ustnych.

Ponadto dr "Jack" Li Peng zgłosił niedawno obiecującą próbę zwaną zeskrobiną z migdałków i ust (TOSc). Podsumowując, TOSc polega na użyciu patyczka inseminacyjnego do pobierania próbek z obszaru migdałków loch, zbierając lepką próbkę. Jego wstępne dane porównujące wyniki PCR z surowicy, skrobania migdałków i TOSc u 30 macior wykazały wyższą dodatność TOSc w porównaniu z innymi rodzajami próbek. W chwili pisania tego tekstu prowadzone są badania, których wyniki powinny być wkrótce dostępne. Kolejną zaletą pobierania próbek TOSc jest to, że nie wymaga ono przytrzymywania loch, dzięki czemu proces pobierania próbek odbywa się ze stosunkowo dużą prędkością w porównaniu do konwencjonalnej metody skrobania migdałków.

Tabela 1: Techniki monitorowania na próbkach opartych na populacji.

Monitoring kliniczny

Monitoring diagnostyczny jest bardzo dokładny i charakteryzuje się doskonałą swoistością i czułością. Jednak w większości stad zwykle nie jest on wykonywany na co dzień. Aby wypełnić tę lukę i utrzymać stado hodowlane pod kontrolą 24 godziny na dobę, 7 dni w tygodniu, producenci korzystają z monitorowania klinicznego przy użyciu dostępnych strumieni danych w chmurze. Algorytmy oparte na statystycznej kontroli procesu (SPC) pozwalają na bieżące zautomatyzowane monitorowanie wybranych parametrów przy użyciu danych bazowych specyficznych dla gospodarstwa. Przykłady obejmują liczbę poronień, liczbę loch nieprzyjmujących paszy w fazie ciąży i straty noworodków (martwe urodzenia i zmumifikowane płody). W przypadku znacznego wzrostu jednego lub wielu z tych parametrów, alerty są wysyłane do wstępnie zarejestrowanych użytkowników farmy, którzy mogą przeprowadzić testy diagnostyczne ad hoc w celu ustalenia przyczyny zmian.

Uwagi końcowe

Programy takie jak SDRS dostarczają wielu informacji na poziomie makroepidemiologicznym. Takie informacje są dynamiczne i szybko ewoluują w czasie i przestrzeni. Pobieranie próbek w populacjach świń, w tym płynów ustnych, płynów po zabiegach i końcówek języka, pozwala w praktyczny sposób określić aktywność PRRSV na poziomie pomieszczenia (lub chlewni). Próbki TOSc, jeśli zostaną zatwierdzone, stanowią znaczący krok w kierunku umożliwienia badań przesiewowych loch ciężarnych w kierunku PRRSV. Każde podejście do pobierania próbek służy do odpowiedzi na konkretne pytanie. Na przykład:

• płyny po zabiegach doskonale nadają się do badania aktywności wirusowej całego stada
• rodzinne płyny ustne służą do weryfikacji aktywności PRRSV u świń w wieku odsadzenia
• końcówki języka od martwo urodzonych prosiąt służą do oceny transmisji pionowej.

Oprócz narzędzi do monitoringu diagnostycznego, producenci powinni korzystać z dostępnych danych klinicznych, aby monitorować stado 24 godziny na dobę, 7 dni w tygodniu, a tym samym być w stanie wcześnie wykryć ogniska choroby, umożliwiając szybką reakcję i dostosowanie środków bioasekuracji w razie potrzeby, aby zapobiec dalszemu rozprzestrzenianiu się patogenu na inne populacje świń mające powiązania epidemiologiczne ze stadem. Podsumowując, te metody pobierania próbek wyposażają producentów i odpowiednich lekarzy weterynarii w szereg narzędzi pozwalających zrozumieć, gdzie występuje PRRSV w każdym stadzie.