0
Wytwarzanie genetycznie zmodyfikowanych świń jest naukowo istotne, dzięki zastosowaniu w badaniach podstawowych, biomedycynie i produkcji mięsa. Klonowanie było pierwszą zastosowaną tu techniką, chociaż opracowano łatwiejsze i tańsze metody, takie jak mikroiniekcja, elektroporacja lub lipofekcja oocytów i zygot. W niniejszej pracy analizowaliśmy produkcję genetycznie zmodyfikowanych zarodków poprzez lipofekcję oocytów zona-pellucida-intact przy użyciu LipofectamineTM CRISPRMAXTM Cas9 w porównaniu z metodą elektroporacji. Oceniano dwa czynniki: wzrost stężenia kompleksów lipofektamina-rybonukleoproteina (LRNPC) (5% vs. 10%) oraz stężenie rybonukleoproteiny w obrębie kompleksów (1xRNP vs. 2xRNP).
Stwierdziliśmy, że wzrost stężenia LRNPC miał szkodliwy wpływ na rozwój zarodka, a następnie wpływ na liczbę zmutowanych zarodków. Grupa 5% miała podobny wskaźnik zmutowanych blastocyst do metody elektroporacji (odpowiednio 5,52% i 6,38%). Wzrost stężenia rybonukleoproteiny wewnątrz kompleksów nie miał wpływu na wskaźnik blastocyst i wskaźnik mutacji, przy czym wskaźnik zmutowanych blastocyst był podobny zarówno w grupach lipofekcji 1xRNP i 2xRNP, jak i w grupie elektroporacji (odpowiednio 1,75%, 3,60% i 3,57%).
Wykazaliśmy, że możliwa jest produkcja zarodków typu knock-out poprzez lipofekcję całych oocytów świni z podobną wydajnością jak w przypadku elektroporacji, chociaż potrzebna jest większa optymalizacja, głównie w zakresie wykorzystania bardziej wydajnych pęcherzyków do enkapsulacji o różnym składzie.
Piñeiro-Silva C, Navarro-Serna S, Belda-Pérez R, Gadea J. Production of Genetically Modified Porcine Embryos via Lipofection of Zona-Pellucida-Intact Oocytes Using the CRISPR/Cas9 System. Animals. 2023; 13(3):342. https://doi.org/10.3390/ani13030342